西尼羅河病毒（wnv）核酸檢測試劑盒(rt-pcr 熒光探針法)pcr反應的特異性決定因素：
1.引物與模板dna特異正確的結(jié)合。
2.堿基配對原則。
3. tag dna聚合酶合成反應的忠實性。
4.靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及 tag dna聚合醇耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大増加加,被擴増的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
靈敏度高
pcr產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式増加的,能將皮克(pg=10-129)量級的起始待測模板擴増到微克(ug=10-69)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,pcr的靈敏度可達3個rfu(空斑形成單位);在細菌學中zu小檢出率為3個細菌。
(3)簡便、快速
pcr反應用耐高溫的 tag dna聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在dna擴増液和水浴鍋上進行變性退火-延伸反應,一般在2-4小時完成擴増反應。擴増產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4)對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,dna粗制品及總rna均可作為擴増模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活pcr技術概論。