賴氨酸-瓊脂糖凝膠4b是利用溴化氰法通過賴氨酸的α-氨基將其鍵合在瓊脂糖凝膠上,賴氨酸上游離的ε-氨基和α-羧基可以和一系列的生物分子相互作用。主要用于纖維蛋白溶酶原、血纖維蛋白溶酶原激活劑和核蛋白體核糖核酸的分離以及雙鏈dna的純化。
賴氨酸-瓊脂糖凝膠4b產(chǎn)品參數(shù)
產(chǎn)品名稱:賴氨酸-瓊脂糖凝膠4b(lysine- sepharose 4 b)
貨號:s8911
基質(zhì):6% 交聯(lián)瓊脂糖凝膠
配基: 賴氨酸
配基密度:4-7μmol/ml
顆粒大?。?5-165μm
每毫升結合量:0.6mg血纖維蛋白溶酶原
大流速:75cm/h
工作ph:2~11
化學穩(wěn)定性:在所有的水溶性緩沖液中保持穩(wěn)定;
操作溫度:室溫
賴氨酸-瓊脂糖凝膠4b使用方法
1.裝柱
(1)將所有的試劑和填料達到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
(2)根據(jù)柱子大小取所需凝膠的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1比例)配成勻漿。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液體(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。
(4)用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意不要使用氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
(5)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩(wěn)定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2.平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和ph不變。
3.上樣
可以根據(jù)上樣物質(zhì)的性質(zhì)選擇合適ph的緩沖液,通常建議使用ph 為7.5的磷酸鹽緩沖液。
4.洗脫
通常使用gao2m濃度的鹽溶液進行洗脫,也可以選擇梯度洗脫或者溫度梯度洗脫。
5.再生
再生取決于樣品的性質(zhì),賴氨酸瓊脂糖4 b可以用2 - 3床體積的高ph值(0.1 m tris-hcl,0.5 m氯化鈉,ph值8.5)和低ph值(0.1 m醋酸鈉,0.5 m氯化鈉,ph值4.5)交替洗滌再生。重復3次,緩沖液每次至少5柱床體積。
如果在分離的過程中使用了去垢劑或者變性劑,在再生的過程中也可以使用。
純化纖溶酶原后,應該使用ph為7.5的 50 mm(含有1 m氯化鈉和0.2 m ε-氨己酸)的磷酸鹽再生。核酸純化后,用至少5倍柱體積的ph為7.5的的50 mm的磷酸鹽(含2 m氯化鈉)清洗再生。
6.在位清洗
在一些使用的程序中,如果存在不容易洗脫的沉淀蛋白或者脂類物質(zhì),可以用
0.1%的triton沖洗一分鐘,清洗完畢后,立刻用至少5倍柱體積緩沖液平衡柱子。
賴氨酸-瓊脂糖凝膠4b注意事項
(1)凍干的賴氨酸瓊脂糖凝膠4b 密封貯存于8°c以下干燥的地方,溶脹的凝膠應貯存在4-8°c(保存溶液為20%乙醇),不能冷凍。
(2)在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干,氣泡進入。