氨基柱是一款既可以正相使用,也可以反相使用,但是我們要注意到的是:正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的,正常情況新氨基柱出廠時保存在正相環(huán)境中。
01
用于正相的體系:
1.1 *先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再根據(jù)流動相選用極性相近的二氯甲烷以相同的流速沖10倍柱體積,后換成你實(shí)驗(yàn)的流動相。
1.2 正相使用時,不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析;流動相要*脫氣,并不得含有羰基化合物和過氧化物。
1.3任何時候更換流動相時都要確保新流動相與柱子原保存液可互溶。
02
用于反相的體系:
2.1 由于新的氨基柱保存在正己烷-乙腈(99:1)中,與反相流動相是不互溶的,因此如果使用反相的方法,必須用至少10倍柱體積的異丙醇沖洗過渡(約2h,0.5ml/min),以除去正相保存溶液。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大,會導(dǎo)致柱壓很高,適當(dāng)調(diào)低流速即可。
2.2 再用至少10倍柱體積95%水-5%乙腈(或甲醇)沖洗(不含緩沖鹽的流動相可省去)過渡,后用流動相平衡。
2.3 用完后洗柱時,必須先用95%水沖洗至少10倍柱體積,除去所用緩沖鹽(不含緩沖鹽的流動相可省去)。然后保存于乙腈/水(80:20)溶液(一個月內(nèi))中。*不用的話,建議用異丙醇保存(一個月以上)。
2.4 新柱子一定要置換掉保存溶液,用異丙醇保存的柱子在使用前也需要花一定的時間給置換掉。
2.5 反相條件下使用時,要特別注意控制ph值范圍(根據(jù)你色譜柱耐受使用ph),ph值越低越有發(fā)生水解的危險,流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險。
2.6 還有一種情況是,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時,酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。---------建議用10-15倍的柱體積的為ph=11 nh3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。
2.7 柱子再生:以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的ph10.0的氨水或氫氧化鈉水溶液沖柱子(注意ph值切不可超過11.0),立即用水(0.5ml/min的流速,30倍柱體積)沖洗,再乙腈/水(80:20)溶液沖洗保存。