小麥源性成分探針法熒光定量pcr試劑盒原理簡述:
1. taqman熒光探針:pcr擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;pcr擴增時,taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條dna鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與pcr產(chǎn)物形成*同步。而新型taqman-mgb探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(snp),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的*技術(shù)平臺。
2. sybr熒光染料:在pcr反應(yīng)體系中,加入過量sybr熒光染料,sybr熒光染料非特異性地?fù)饺雂na雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的sybr染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與pcr產(chǎn)物的增加*同步。sybr僅與雙鏈dna進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定pcr反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。pcr產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定dna序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
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