目的建立抗*的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對**中黃芩、甘草、桔梗進行鑒別；用高效液相色譜法測定制劑中*的含量。采用aichrombond-aq-c18色譜柱(4.6mm×150mm,5μm)；流動相：甲醇-水－磷酸(43∶57∶0.2)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm；進樣量：10μl。結(jié)果薄層色譜專屬性強；*的線性范圍為0.0496～0.2976μg,r＝0.9997,平均加樣回收率為101.80%,rsd＝1.86%(n＝6)。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,可作為抗*的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
【關(guān)鍵詞】抗*；*；黃芩；甘草；桔梗；高效液相色譜法
abstract：objectivetoestablishthequalitystandardforkangganmaogranule.methodsradixscutellariae,radixetrhizomeglycyrrhizaeandradixplatycodonisintheprescriptionwereidentifiedbytlc.thecontentofthebaicalinwasdeterminedbyhplc.thecolumnofaichrombond-aq-c18(4.6mm×150mm,5μm)wasused.thephasewasch3oh-h2o-h3po4(43∶57∶0.2),withtheflowof1.0ml/min,thecolumntemperatureof30℃,andpeaksweredetectedat280nm.resultsthecharacteristicofidentificationbytlcwasdistinctandhighlyspecific.thelinearrangeofbaicalinwas0.0496～0.2976μg,r＝0.9997,theaveragerecoverywas101.80%,rsd＝1.86%(n＝6).conclusionthemethodwaseasytooperatewithaccurateresultandgoodreproducibility.itcanbeusedeffectivelyforthequalitycontrolofthepreparation.
keywords：kangganmaogranule；baicalin；radixscutellariae；radixetrhizomeglycyrrhizae；radixplatycodonis；hplc
抗***由金銀花、連翹、黃芩等9味藥材組成。用于風(fēng)熱感冒,發(fā)熱惡風(fēng),鼻塞**,咽喉腫痛。本試驗對方中黃芩、甘草、桔梗進行了鑒別,同時用hplc法測定了制劑中*的含量,建立了可靠、準(zhǔn)確、專屬性強的質(zhì)量控制方法。
1儀器與試藥
日本島津lc-10advp高效液相色譜儀,島津spd-10avp紫外檢測器,hw色譜工作站。黃芩藥材購自淮安市藥材公司(由江蘇某公司提供),經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)王春根教授進行品種鑒定。*對照品購自中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用,批號10715-200212)。10批產(chǎn)品由江蘇某公司生產(chǎn)并提供(批號分別為050601、050602、050603、050604、050605、050701、50702、050703、050704、050705)。甲醇、乙醇等試劑由上海久億化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn),均為分析純或色譜純。
2定性鑒別
2.1黃芩薄層色譜鑒別
取*對照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。取本品10g,加甲醇30ml,超聲處理30min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水5ml,加熱使溶解,趁熱濾過,濾液用鹽酸調(diào)節(jié)ph值至1～2,搖勻,80℃保溫30min,放冷,離心15min,殘渣加甲醇0.5ml使溶解,作為供試品溶液[1]。取除黃芩以外的其它8味藥材按**比例制得陰性樣品10g,用與供試品溶液相同的方法制得陰性對照液。
吸取上述3種溶液各10μl,分別點于同一硅膠g薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點,而陰性對照液無此斑點。
2.2甘草薄層色譜鑒別
取甘草對照藥材5g,加鹽酸1ml及石油醚(60～90℃)25ml,加熱回流1h,濾過,濾液揮干,殘渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解,作為對照藥材溶液[2]。取本品15g,加鹽酸2ml及石油醚(60～90℃)40ml,用與對照藥材溶液相同的方法制得供試品溶液。取除甘草以外的其它8味藥材按**比例制得的陰性樣品15g,用與供試品溶液相同的方法制得陰性對照液。
吸取上述3種溶液各10μl,分別點于同一硅膠g薄層板上,以石油醚(60～90℃)-甲苯-乙乙酯-冰乙酸(10∶20∶7∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%的磷鉬酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色的斑點,而陰性對照液無此斑點。
2.3桔梗薄層色譜鑒別[3]
取桔梗對照藥材5g,加7%的硫酸乙醇-水(1∶3)混合液25ml,加熱回流1h,放冷,用提取2次,每次20ml,合并液,蒸干,殘渣加甲醇1ml使溶解,作為對照藥材溶液。取本品15g,加7%的硫酸乙醇-水(1∶3)混合液40ml,用與對照藥材溶液相同的方法制得供試品溶液。取除桔梗以外的其它8味藥材按**比例制得的陰性樣品15g,用與供試品溶液相同的方法制得陰性對照液。
吸取上述3種溶液各10μl,分別點于同一硅膠g薄層板上,以-(1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點,而陰性對照液無此斑點。
3含量測定
本方中黃芩用量較大,且其中含有的*化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,測定方法簡便,故在含量測定時選擇*為指標(biāo)[4]。
3.1色譜條件
aichrombond-aq-c18色譜柱(4.6mm×150mm,5μm)；流動相：甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2),流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm；進樣量：10μl。
3.2對照品溶液的制備
精密稱取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的*對照品,加甲醇制成每1ml含0.496mg的溶液,搖勻,作為母液。從中吸取5ml,用甲醇稀釋至50ml,制成每毫升含0.0496mg*溶液,備用。
3.3供試品溶液的制備
取10個批號的抗*,每批取2份,研細(xì),每份各取0.2g,精密稱定,置具塞三角燒瓶中,精密加入甲醇10ml,稱定重量,超聲處理30min,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
3.4系統(tǒng)適應(yīng)性考察
分別精密吸取*對照液和各供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀。理論塔板數(shù)以*峰計,不低于2500,此時,*峰與其它相鄰峰基線分離,分離度r>1.5,保留時間約為14min。色譜圖見圖1。
3.5線性關(guān)系的考察
分別精密吸取濃度為0.0496mg/ml*對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0ml定容至10ml量瓶中,搖勻,制成4.96、9.92、14.88、19.84、29.76μg/ml的系列溶液。
精密吸取5個不同濃度的對照液各10μl,注入液相色譜儀,各進2針。以濃度c為橫坐標(biāo),以*平均峰面積y為縱坐標(biāo)進行線性回歸,得回歸方程：c＝2×10-4a＋0.7879,r＝0.9997,線性范圍為0.0496～0.2976μg。
3.6精密度試驗
精密吸取濃度為9.92μg/ml對照品溶液10μl,連續(xù)進樣5次,測得*峰面積值rsd＝2.48%。
3.7穩(wěn)定性試驗
精密吸取批號為050705的**個供試液10μl,每間隔2h進一針,連續(xù)考察10h,結(jié)果*峰面積值的rsd＝2.76%,表明在10h內(nèi)基本穩(wěn)定。
3.8專屬性試驗
在與樣品測定*相同的條件下,精密吸取黃芩陰性對照液10μl,注入液相色譜儀,連續(xù)進3針,陰性無干擾。說明在抗*中,*的專屬性較強。
3.9重復(fù)性試驗
取同一批號(050705)樣品0.25g,共6份,精密稱定,按樣品測定項下的方法測定,測得樣品中指標(biāo)成分*的含量,rsd＝2.12%,結(jié)果表明重復(fù)性良好。
3.10加樣回收率試驗
取批號為050705的抗*0.25g,精密稱定6份,各精密加入濃度為29.76μg/ml的*對照液2.5ml,分別用與“3.3”項下相同的方法制得供試液。并用與“3.11”項下相同的方法測得樣品中指標(biāo)成分*的含量,結(jié)果見表1。表1加樣回收率試驗結(jié)果(略)
3.11樣品測定
精密吸取各供試液10μl,注入液相色譜儀,分別進2針。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量,根據(jù)取樣量和稀釋度,計算含量,結(jié)果見表2。表2樣品含量測定結(jié)果(略)
由實驗結(jié)果可知,儀器的精密度、指標(biāo)成分的穩(wěn)定性、方法的重現(xiàn)性和加樣回收率等均較好,符合定量要求。根據(jù)以上測定結(jié)果,暫定每1g抗*中含黃芩以*(c21h18o11)計,不得少于0.49mg。
4討論
上述實驗中,黃芩、甘草、桔梗的鑒別專屬性強,重現(xiàn)性好,操作簡便,故正式納入抗*質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中；而荊芥、*的鑒別,因陰性有干擾,專屬性不強,故未納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。
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