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      細(xì)胞破碎的四種方法(二)

      發(fā)布時(shí)間:2024-09-27
      三、化學(xué)破碎法:指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜,使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變 。
      有些動(dòng)物細(xì)胞,例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉(sds)、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞。濃度一般為1mg/ml。
      四、酶學(xué)破碎法 :選用合適的酶,使細(xì)胞壁遭到破壞,進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎開來。
      細(xì)菌細(xì)胞壁較厚,可采用*處理效果更好。
      裂解液標(biāo)準(zhǔn)配方: :50mm tris-hcl(ph8.5~9.0), 2mm edta, 100mm nacl, 0.5% triton x-100, 1mg/ml*。(*在這個(gè)ph范圍內(nèi)比較好發(fā)揮作用) 。
      綜合敘述:無論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞,都會(huì)使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少,加入二異丙基氟磷酸(dfp)可以抑制或減慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入pmsf也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且應(yīng)該在破碎的同時(shí)多加幾次;另外,還可通過選擇ph、溫度或離子強(qiáng)度等,使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取。
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