(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培育基無(wú)需37℃水浴。
(3) 培育基保持zuiph 值7.0-7.2。
(4) 嚴(yán)格控制制造培育基的水質(zhì),容器定期刷洗。
(5) 掌握細(xì)胞傳代的zui機(jī)遇,細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。
一、化凍
將血清從-20 度冰箱中取出,室溫(或浸于自來(lái)水中)化凍(約需求30分鐘至2小時(shí),也可放于4度冰箱化凍過(guò)夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入4度冰箱中暫時(shí)保存)
二、滅活
(1)放入室溫的水浴鍋內(nèi)開(kāi)端加熱(一起放入一個(gè)空的血清瓶,內(nèi)裝100ml自來(lái)水,插入一根溫度計(jì),溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn))
(2)當(dāng)溫度計(jì)顯示56度時(shí),停止加熱,改為連續(xù)加熱,保持56度(±0.5度)30分鐘(±3分鐘;若不小心使溫度上升超過(guò)56度,則:若仍未超過(guò)60度,且時(shí)間很短,比如不超過(guò)5分鐘,則仍可運(yùn)用;若超過(guò)60度,或許時(shí)間較長(zhǎng),則棄去不用,或許測(cè)驗(yàn)用于一些一般細(xì)胞的培育)
(3)取出,天然冷卻至室溫(約需1-3小時(shí)),可分裝或-20度繼續(xù)凍存。
三、分裝
(1)轉(zhuǎn)入無(wú)菌間,在超凈臺(tái)內(nèi)將血清分裝入10ml離心管中(留意預(yù)先要將血清輕輕搖動(dòng)數(shù)周、混勻;用吸液管或吹大管吹出血清時(shí)要留意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很簡(jiǎn)單產(chǎn)生氣泡;假如產(chǎn)生氣泡, 則在酒精燈火焰上過(guò)一下)。
(2)放入-20 度冰箱凍存。
(3)全部操作約需求4-6小時(shí)。