mtt法又稱mtt比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性mtt還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚(formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，mtt結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。
常用實驗步驟：
1.接種細胞：用含10%胎牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔合適的細胞數(shù)量接種到96孔板，每孔體積180ul；
2.培養(yǎng)細胞：同一般培養(yǎng)條件，可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間；
3.呈色：每孔加mtt溶液（5 mg/ml用pbs緩沖液ph=7.4配制）20ul。繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心棄去孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細胞，需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150uldmso，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。
影響實驗關(guān)鍵因素：
1. 細胞消化。若消化出現(xiàn)問題，則會影響細胞的活性，進而影響od值。對于 mda-mb-231、mcf-7、hs-578t 等一系列容易消化的細胞，消化時*中不添加edta，消化時也僅需*浸潤數(shù)秒即可。然而，對于sw480等一系列難以消化的細胞，*中需添加濃度為0.25%的edta；
2. 接種數(shù)量。對于細胞接種數(shù)量要適宜，過小或過大均會影響od值（過小細胞容易死亡，過大細胞容易生長擁擠）；
3. 培養(yǎng)液的棄去。或用移液器吸取孔內(nèi)培養(yǎng)液，吸取的時候要注意移液頭要緊貼孔內(nèi)側(cè)壁吸取，不要觸碰底部的紫色結(jié)晶。或?qū)?6孔板倒扣于濾紙上來吸取孔內(nèi)的培養(yǎng)液。
4. 結(jié)晶物的溶解。加入dmso，放入37℃孵箱內(nèi)孵育10～20 min，有助于dmso對紫色結(jié)晶物的溶解。
困惑：
棄液，細胞脫落或培養(yǎng)液里的紫色結(jié)晶易吸去，重復(fù)性差，怎么辦？
建議先用平板離心機離心96孔板，之后參考以下*方法：方法1：用1ml醫(yī)用的注射器加上針頭吸取液體，吸取時要把板子斜放，沿著壁吸取。
方法2：優(yōu)化操作，使用三聯(lián)溶解液：10%sds，5%異丁醇，0.012 mol/lhcl，蒸餾水溶解。
文獻：評價抗癌物質(zhì)活性的改良mtt方法.周建軍.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1993，24（10）：455-457.
方法3：使用mtsblue。mtsblue的活性成份是resazurin，一種無毒、可透膜的藍色染料，有微弱的熒光性。聯(lián)科生物mtsblue采用單一試劑，只需加入培養(yǎng)基即可連續(xù)、快速地檢測細胞的增殖狀況。相比于mtt，無毒、即用、可連續(xù)檢測，值得*。
方法4：使用cck-8試劑，它利用有高度水溶性的黃色甲染料，且cck-8試劑組分單一，無需其它組分預(yù)混等操作。相比mtt，cck-8：
1、操作簡便，只需一步即可得到結(jié)果；
2、省時即開即用，無需配置其它溶液；
3、安全，無需放射性同位素和有機溶劑；
4、快速，省去了溶解沉淀等操作；
5、重現(xiàn)性好，步驟少、損失少。
mtsblue檢測bhk21 細胞：
聯(lián)科生物提供不同規(guī)格mtt、mtsblue 、cck8試劑供實驗選擇。有需求的同學(xué)，請聯(lián)系聯(lián)科生物當?shù)劁N售。
產(chǎn)品列表：
存貨編碼 存貨名稱 規(guī)格型號 目錄價
70-mtt001 mtt細胞增殖檢測試劑盒 100assays 150
70-mtt002 mtt細胞增殖檢測試劑盒 200assays 200
70-mtt005 mtt細胞增殖檢測試劑盒 500assays 300
70-mtt010 mtt細胞增殖檢測試劑盒 1000assays 500
70-cc0601 mtsblue cell viability reagent 100 t 90
70-cc0602 mtsblue cell viability reagent 500 t 300
70-cc0603 mtsblue cell viability reagent 1000 t 600
70-cc0604 mtsblue cell viability reagent 10000 t 2000
70-cck801 cell counting kit-8(cck-8細胞增殖檢測試劑盒) 100t 200
70-cck802 cell counting kit-8(cck-8細胞增殖檢測試劑盒) 200t 360
70-cck805 cell counting kit-8(cck-8細胞增殖檢測試劑盒) 500t 600
70-cck810 cell counting kit-8(cck-8細胞增殖檢測試劑盒) 1000t 1000
70-cck830 cell counting kit-8(cck-8細胞增殖檢測試劑盒) 3000t 2400
70-cck8100 cell counting kit-8(cck-8細胞增殖檢測試劑盒) 10000t 6000