**法 酶水解法 一、目的與要求： 1、明確與掌握各類食品中淀粉含量的原理及測定方法。 2、掌握用酶水解法和酸水解法測定淀粉的方法。 二、原理 樣品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類后，其中淀粉用*水解成雙糖，再用鹽酸將雙糖水解成單糖，*后按還原糖測定，并折算成淀粉。 三，試劑： 1、0.5％*溶液：稱取*0.5克，加100毫升水溶解，數(shù)滴甲苯或，防止長霉，貯于冰箱中。 2、碘溶液：稱取3.6克*溶于20毫升水中，加入1.3克碘，溶解后加水稀釋至100毫升。 3、 4、85％乙醇 5、6n鹽酸：量取50毫升鹽酸加水稀釋至100毫升。 6、甲基紅指示液：0.1％乙醇溶液。 7、20％氫氧化鈉溶液。 8、堿性酒石酸銅甲液：稱取34.639克硫酸銅(cus04·5h2o)。加適量水溶解，加0.5毫升硫酸，再加水稀釋至500毫升，用精制石棉過濾。 9、堿性酒石酸銅乙液：稱取173克酒石酸鉀鈉與50克氫氧化鈉，加適量水溶解，并稀釋至500毫升，用精制石棉過濾，貯存于橡膠塞玻璃瓶內(nèi)。 10、0.1000n*標(biāo)準(zhǔn)溶液。 11、硫酸鐵溶液：稱取50克硫酸鐵，加入200毫升水溶解后，人100毫升硫酸，冷后加水稀釋至1000毫升。 四、操作方法： 1、樣品處理： 稱取2-5克樣品，置于放有折疊濾紙的漏斗內(nèi)，先用50毫升分5次洗除脂肪，再用約100毫升85％乙醇洗去可溶性糖類，將殘留物移入250毫升燒杯內(nèi)，并用50毫升水洗濾紙及漏斗，洗液并入燒杯內(nèi)，將燒杯置沸水浴上加熱15分鐘，使淀粉糊化，放冷至60℃以下，加20毫升*溶液，在55-60℃保溫1小時(shí)，并時(shí)時(shí)攪拌。然后取1滴此液加1滴溶液，應(yīng)不顯現(xiàn)藍(lán)色，若顯藍(lán)色，再加熱糊化并加20毫升*溶液，繼續(xù)保溫，直至加碘不顯藍(lán)色為止。加熱至沸，冷后移入250毫升容量瓶中，并加水至刻度，混勻，過濾，棄去初濾液。取50毫升濾液，置于250毫升錐形瓶中，并加水至刻度，沸水浴中回流1小時(shí)，冷后加2滴甲基紅指示液，用20％氫氧化鈉溶液中和至中性，溶液轉(zhuǎn)入100毫升容量瓶中，洗滌錐形瓶，洗液并人100毫升容量瓶中，加水至刻度，混勻備用。 b、測定： 吸取50毫升處理后的樣品溶液，于400毫升燒杯內(nèi)，加入25毫升堿性酒石酸銅甲液及25毫升乙液，于燒杯上蓋一表面皿，加熱，控制，在4分鐘內(nèi)沸騰，再準(zhǔn)確煮沸2分鐘，趁熱用鋪好石棉的古氏坩堝或c4垂融坩堝抽濾，并用60℃熱水洗滌燒杯及沉淀，至洗液不呈堿性為止。將古氏坩堝或垂融坩堝放回原400毫升燒杯中，加25毫升硫酸鐵溶液及25毫升水，用玻棒攪拌使氧化亞銅*溶解，以0.1000n*標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色為終點(diǎn)。 同時(shí)量取50毫升水及與樣品處理時(shí)相同量的*溶液，按同一方法 做試劑空白實(shí)驗(yàn)。 計(jì)算：x1=((a1-a2)×0.9)/( m1×50/250×v1/100×1000)×100 x1：樣品中淀粉的含量，％； a1：測定用樣品中還原糖的含量，mg； a2：試劑空白中還原糖的含量，mg； 0.9：還原糖(以葡萄糖計(jì))換算成淀粉的換算系數(shù)； m1：稱取樣品質(zhì)量，g； v1：測定用樣品處理液的體積，毫升(m1)。**法 酸水解法 一、原理： 樣品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類后，其中淀粉用酸水解成具有還原性的 單糖，然后按還原糖測定，并折算成淀粉。 二、試劑： 1、； 2、85％乙醇溶液； 3、6n鹽酸溶液； 4、40％氫氧化鈉溶液； 5、10％氫氧化鈉溶液； 6、甲基紅指示液：0.2％乙醇溶液 7、精密ph試紙 8、20％乙酸鉛溶液 9、10％硫酸鈉溶液 10、 11、堿性酒石酸銅甲液。 (配制見前) 12、堿性酒石酸銅乙液； (配制見前) 13、硫酸鐵； (配制見前) 14、0.1000n*標(biāo)液 三、儀器： 1、水浴鍋 2、高速組織搗碎機(jī)：1200r／min 3、皂化裝置并附250毫升錐形瓶。 四、操作方法： 1、 樣品處理 a、糧食，豆類、糕點(diǎn)、餅干等較干燥的樣品，稱取2.0-5.0克磨碎過40目篩的樣品，置于放有慢速濾紙的漏斗中，用30毫升分三次洗去樣品中的脂肪，棄去。再用150毫升85％乙醇溶液分?jǐn)?shù)次洗滌殘?jiān)?，除去可溶性糖類物質(zhì)。并濾干乙醇溶液，以100毫升水洗滌漏斗中殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至250毫升錐形瓶中，加入30毫升6n鹽酸，接好冷凝管，置沸水浴中回流2小時(shí)。回流完畢后，立即置流水中冷卻。待樣品水解液冷卻后，加入2滴甲基紅指示液，先以40％氫氧化鈉溶液調(diào)至黃色，再以6n鹽酸校正至水解液剛變紅色為宜。若水解液顏色較深，可用精密ph試紙測試，使樣品水解液的ph約為7。然后加20毫升20％乙酸鉛溶液，搖勻，放置10分鐘。再加20毫升10％硫酸鈉溶液，以除去過多的鉛。搖勻后將全部溶液及殘?jiān)D(zhuǎn)入500毫升容量瓶中，用水洗滌錐形瓶，洗液合并于容量瓶中，加水稀釋至刻度。過濾，棄去初濾液20毫升，濾液供測定用。 b、蔬菜、水果、各種糧豆含水熟食制品：按1：1加水在組織搗碎機(jī)中搗成勻漿(蔬菜、水果需先洗凈、晾干、取可食部分)稱取5-10克勻漿(液體樣品可直接量取)，于250毫升錐形瓶中，加30毫升振搖提取(除去樣品中脂肪)，用濾紙過濾除去，再用30毫升淋洗兩次，棄去。以下按a自“再用150毫升85％乙醇溶液”起依法操作。 2、測定： 吸取50毫升處理后的樣品溶液，于400毫升燒杯內(nèi)，加25毫升堿性酒石酸銅甲液及25毫升乙液。于燒杯上蓋一表面皿加熱，控制在4分鐘沸騰再準(zhǔn)確煮沸2分鐘，趁熱用鋪好石棉的古氏坩堝或g4垂融坩堝抽濾，并用60℃熱水洗滌燒杯及沉淀，至洗液不呈堿性為止。將古氏坩堝或垂融坩堝放回原400毫升燒杯中，加25毫升硫酸鐵溶液及25毫升水，用玻棒攪拌使氧化銅*溶解，以0.1000n*標(biāo)液滴定至微紅色為終點(diǎn)。 同時(shí)吸取50毫升水，加與測樣品時(shí)相同量的堿性酒石酸銅甲乙液、硫 酸鐵溶液及水，按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。 計(jì)算： x2=((a3-a4)×0.9)/( m2×v2/500×100)------------------------×100 式中： x2：樣品中淀粉含量，％； a3：測定用樣品中水解液中還原糖含量，mg； a4：試劑空白中還原糖的含量，mg； m2：樣品質(zhì)量，mg； v2：測定用樣品水解液體積，m1； 500：樣品液總體積，ml； ， 0.9：還原糖折算成淀粉的換算系數(shù)。
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