一．試劑制備：
1.分離膠緩沖液（ph8.9）:36.6gtris,48ml1mol/l的hcl,或先加水至80ml,用濃hcl調(diào)ph，再定容至100ml.
2.濃縮膠緩沖液（ph6.7）：5.98gtris,48ml1mol/l的hcl, 或先加水至80ml,用濃hcl調(diào)ph，再定容至100ml.
3.30%丙烯酰胺（ph≤7.0）：29g丙烯酰胺和1g甲叉雙丙烯酰胺，溶于60ml水中，加熱至37?c溶解，補(bǔ)水至100ml，用棕色瓶貯存于室溫，幾個(gè)月后重新配置。
4.10％過(guò)硫酸銨（w/v）：1g溶于10ml水中，4?c保存數(shù)周，盡量現(xiàn)用現(xiàn)配。
5.四甲基乙二胺(temed)
6.10％sds。將10gsds溶于80ml重蒸水中并輕緩攪拌（室溫低時(shí)需水浴加熱溶解），再定容至100ml,室溫存放。
7.樣品緩沖液：5ml1mol/l的tris-hcl（ph6.7），2.5gsds,1ml巰基乙醇，0.05g溴酚蘭，10g蔗糖，加水定容至100ml。
8．考馬斯亮藍(lán)染色液：0.25g考馬斯亮藍(lán)r-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀釋至100ml。
9．脫色液：90ml甲醇:水（1:1）和10ml冰醋酸配成100ml脫色液
10．tris-甘氨酸電泳緩沖液（ph8.3）：在900ml去離子水中溶解15.1gtris堿，94g甘氨酸，加入50ml10％（w/v）的電泳級(jí)sds貯液，用去離子水補(bǔ)至1000ml量則成5×貯液。
二．電泳
1.用1％瓊脂將長(zhǎng)玻璃板下端封住，冷凝30分，灌12％分離膠（4.9ml蒸餾水，6.0ml30％丙烯酰胺，3.8ml1.5mol/ltris-hcl,150μl10%sds, 150μl 10%過(guò)硫酸銨, 6μl temed），灌到至短玻璃板4cm，用水封住，冷凝30分后將水倒出，吸干，灌滿(mǎn)5％濃縮膠（5.5ml蒸餾水，1.3ml30％丙烯酰胺，1.0ml1.5mol/ltris-hcl,80μl10%sds, 80μl 10%過(guò)硫酸銨, 8μl temed）后立即插入梳子，冷凝30分后取出梳子，將1×電泳緩沖液倒入電泳槽，并淹沒(méi)短玻璃板
2.取30μl蛋白提取液與30μl樣品緩沖液混合，于100℃水浴加熱3min使蛋白變性，用微量進(jìn)樣器以50μl的量注入點(diǎn)樣孔，不加樣槽注入樣品緩沖液。
3．以濃縮膠中100v，分離膠中180v電壓進(jìn)行電泳，至距底線1cm時(shí)關(guān)閉電源
4.將電泳后的凝膠取出，置于培養(yǎng)皿中，用蒸餾水沖去殘留緩沖液，加入染色液將凝膠*浸泡其中，放入微波爐內(nèi)，高火檔照射20秒，停留1min，再照射10秒，反復(fù)幾次至凝膠上色后倒出染色液，用蒸餾水沖去殘留染色液，加入脫色液，高火檔照射20秒，倒出脫色液，再加入新鮮脫色液照射20秒，重復(fù)5－6次，直至背景清晰透明，于凝膠分析儀上成像分析。