液相色譜儀由高壓*、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成,主要利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器。因其具有、快速、靈敏等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等行業(yè)。液相色譜儀檢測方法按分離機(jī)制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法(正相與反相)、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。
一、液-固吸附色譜法
液-固吸附色譜是以固體吸附劑作為固定相，吸附劑通常是些多孔的固體顆粒物質(zhì)(常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁)，在它們的表面存在吸附中心。液固色譜實(shí)質(zhì)是根據(jù)物質(zhì)在固定相上的吸附作用不同來進(jìn)行分離的。
分離原理:當(dāng)流動相通過固定相時(shí)，吸附劑表面的活性中心就要吸附流動相分子。同時(shí)，當(dāng)試樣分子被流動相帶入柱內(nèi)，只要它們在固定相有一定程度的保留就要取代數(shù)目相當(dāng)?shù)囊驯晃降牧鲃酉嗳軇┓肿?，于是，在固定相表面發(fā)生競爭吸附。
二、液-液分配色譜法
按照固定相與流動相的極性差別，可把液-液色譜法分為正相與反相色譜法兩類。
(1) 正相液-液色譜法 流動相極性小于固定相極性的液-液色譜法稱為正相液-液色譜法，簡稱正相色譜法或稱正相洗脫、正相沖洗。在作正相洗脫時(shí)，主要靠組分的極性差別產(chǎn)生的溶解度差別而分離。樣品中極性小的組分先流出色譜柱，極性大的組分后出柱。這是因?yàn)闃O性小的組分在固定相中的溶解度小，容量因子小的緣故。
(2) 反相液-液色譜法 流動相極性大于固定相極性的液-液色譜法稱為反相液-液色譜法，簡稱反相色譜法或稱為反相洗脫/沖洗。在作反相洗脫時(shí)，樣品中極性大的組分先流出色譜柱，極性小的組分后出柱，與正相洗脫正好相反。
三、離子交換色譜法
離子交換色譜法是利用離子交換原理和液相色譜技術(shù)的結(jié)合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法。凡在溶液中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法進(jìn)行分離。
離子交換色譜利用被分離組分與固定相之間發(fā)生離子交換的能力差異來實(shí)現(xiàn)分離。離子交換色譜的固定相一般為離子交換樹脂，樹脂分子結(jié)構(gòu)中存在許多可以電離的活性中心，待分離組分中的離子會與這些活性中心發(fā)生離子交換，形成離子交換平衡，從而在流動相與固定相之間形成分配，固定相的固有離子與待分離組分中的離子之間相互爭奪固定相中的離子交換中心，并隨著流動相的運(yùn)動而運(yùn)動，zui終實(shí)現(xiàn)分離。
四、離子對色譜法
離子對色譜法是將一種(或多種)與溶質(zhì)分子電荷相反的離子(稱為對離子或反離子)加到流動相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對化合物，從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。根據(jù)被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。主要用于分析離子強(qiáng)度大的酸堿物質(zhì)。
五、分子排阻色譜法
分子排阻色譜法又稱空間排阻色譜法(sec)是利用多孔凝膠固定相的*性產(chǎn)生的一種，主要根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團(tuán)尺寸間的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法。
品分子與固定相之間不存在相互作用，色譜固定相是多孔性凝膠，僅允許直徑小于孔徑的組分進(jìn)入，這些孔對于溶劑分子來說是相當(dāng)大的，以致溶劑分子可以自由的擴(kuò)散出入。樣品中的大分子不能進(jìn)入凝膠孔洞而*被排阻，只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱，首先從柱中被流動相洗脫出來；中等大小的分子能進(jìn)入凝膠中一些適當(dāng)?shù)目锥粗?，但不能進(jìn)入更小的微孔，在柱中受到滯留，較慢地從色譜柱洗脫出來；小分子可進(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞，在柱中受到更強(qiáng)的滯留，會更慢的被洗脫出；溶解樣品的溶劑分子，其分子量zui小，可進(jìn)入凝膠的所有孔洞，zui后從柱中流出，從而實(shí)現(xiàn)具有不同分子大小樣品的*分離。